1.LB(Luria-Bertani)培養(yǎng)液、平板的配制配制每升LB培養(yǎng)液,應(yīng)在950ml去離子水中加入:細(xì)菌培養(yǎng)用酵母提取物(bacto-yeastextract)5g細(xì)菌培養(yǎng)用胰化蛋白胨(bacto-tryptone)10gNaCl10g搖動(dòng)容器直至溶質(zhì)*溶解,用5mol/LNaOH(約0.2ml)調(diào)節(jié)pH值至7.0,加入去離子水至總體積為1L,在151bf/in2(1.034×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20min。L瓊脂平板的配制:先按上述配方配制液體培養(yǎng)基,臨高壓滅菌前加入瓊脂糖15g/L,同法高壓蒸汽滅菌20min。從高壓滅菌器取出培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)輕輕旋動(dòng)以使熔解的瓊脂糖能均勻分布于整個(gè)培養(yǎng)基溶液中,應(yīng)使培養(yǎng)基降溫至50℃時(shí),加入抗生素等不耐熱的物質(zhì)。為避免產(chǎn)生氣泡,混勻培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)采取旋動(dòng)的方式,然后可直接從燒瓶中傾出培養(yǎng)基鋪制平板。90mm直徑的培養(yǎng)皿約需30-50ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)基*凝結(jié)后,應(yīng)倒置平皿并貯存于4℃?zhèn)溆谩?/div>
2.四水磷酸肌酸二鈉鹽:瓊脂糖凝膠的配制根據(jù)所需凝膠的濃度秤取瓊脂糖,加入相應(yīng)電泳緩沖液中,用微波爐加熱煮沸至瓊脂糖*溶解,加入適量E混勻,適當(dāng)冷卻后傾入凝膠鑄槽中,插入梳子,凝膠厚度不超過(guò)梳孔,如有氣泡產(chǎn)生則用玻璃棒驅(qū)除,不能過(guò)早拔除梳子,應(yīng)待凝膠*凝結(jié)后才能拔除梳子。
3.四水磷酸肌酸二鈉鹽: P1、P2、P3的配制P1的配制:在800ml去離子水中溶入Tri堿6.06g,Na2EDTA?2H2O3.72g,用HCl調(diào)整H至8.0,用去離子水調(diào)整容積至1升,每升P1內(nèi)加入RNaseA100mg。P2的配制:在950ml去離子水中溶入aOH8.0g,20%SD50ml,調(diào)整容積至1升。P3的配制:在500ml去離子水中溶入醋酸鉀294.5g,用冰醋酸調(diào)整H值至5.5,用去離子水調(diào)整容積至1升。