bEnd.3 小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞
Product Format: a T25 flask
Culture Properties：貼壁
Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%雙抗
Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
Application: Cells and cancer research
NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.
Components
Item | Specifications |
a T25 flask | 2X106 |
Manual | 1 copy |
Operation steps for cell culture
- 吸走多余培養(yǎng)基，加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞；
- 吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒細(xì)胞表面，培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化；
（細(xì)胞對于消化比較敏感，消化過度會嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài)，導(dǎo)致細(xì)胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細(xì)胞消化到細(xì)胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時即可終止，禁止消化到細(xì)胞*漂浮。混勻細(xì)胞時盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。） - 加入6-8ml*培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹下細(xì)胞混勻；
- 將混勻的細(xì)胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清，再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)；
傳代比例: 不同細(xì)胞生長速度不一，具體傳代比例視細(xì)胞生長速度而定，大部分細(xì)胞適用1:3-1:4傳代，生長較慢的細(xì)胞可以1:2傳代。
Cell cryopreservation
1.凍存液：92%*培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據(jù)實驗室條件自行選擇）
2.降溫步驟：4度10min，-20度2h，-80過夜后液氮保存。
Tips：
- 細(xì)胞經(jīng)過運輸后，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞的死亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。加5ml PBS重懸細(xì)胞，再900-1000rpm(約150g)離心3min，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)瓶。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。
- 細(xì)胞生長不均時，可以將細(xì)胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代。
- 細(xì)胞生長緩慢時，可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)（不超過20%），也可以根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)，選擇傳代細(xì)胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
- 不同細(xì)胞貼壁性差異比較大，所以消化時間差別較大，20s-10min均有可能，具體以細(xì)胞消化到相互分離但未脫落，并可以輕輕吹下為準(zhǔn)，嚴(yán)禁消化到細(xì)胞*漂浮。客戶消化過度導(dǎo)致細(xì)胞死亡、漂浮、生長緩慢，不提供免費售后服務(wù)。
- 干冰發(fā)貨均為兩支，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。若客戶同時復(fù)蘇兩支均狀態(tài)不佳，我方不提供免費售后服務(wù)。
- 細(xì)胞狀態(tài)正常時，應(yīng)盡快凍存細(xì)胞保種，凍存后應(yīng)隨機抽取一支檢測凍存效果。我方不對客戶凍存細(xì)胞導(dǎo)致死亡負(fù)責(zé)，客戶凍存細(xì)胞死亡不提供免費售后服務(wù)。
Notice：
客戶收到細(xì)胞有任何疑問請及時致電我們，細(xì)胞收到后1周內(nèi)沒有任何電話，或其他形式回訪，默認(rèn)為細(xì)胞質(zhì)量沒問題，之后出了任何問題不給予免費售后。細(xì)胞免費售后只提供一次，若重發(fā)后再次培養(yǎng)死亡不再免費補發(fā)，細(xì)胞收貨時已經(jīng)死亡或密度不足的除外。
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