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GENMED血液維生素A高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒
點(diǎn)擊次數(shù):2554 更新時(shí)間:2020-07-14

 

GENMED血液維生素A高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)

 

主要用途

 

GENMED血液維生素A高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)抗氧化處理和有機(jī)溶劑萃取,進(jìn)而在高效液相色譜儀和紫外光譜下(325nm波長(zhǎng))檢測(cè)分析,分離出維生素A即視黃醇波峰,以定量測(cè)定樣品維生素A含量經(jīng)典技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于人體、動(dòng)物等血液(血漿、血清)樣品中維生素A及其衍生物,例如視黃醇(retinol)、視黃醛(retinaldehyde)、視黃酸(retinoic acid、3-脫氫視黃醇(3-dehydroretinol;vitamin A2)、維生素 A 棕櫚酸酯(retinol palmitate)維生素A乙酸酯(retinol acetate)檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。

 

技術(shù)背景

 

視黃酸類(lèi)(retinoid生素AVitamin A)及其相關(guān)衍生物的統(tǒng)稱(chēng),其中包括視黃醇(retinol)、視黃醛(retinaldehyde)、視黃酸(retinoic acid)等。維生素A的結(jié)構(gòu)形式包括視黃醇(vitamin A1)及其酯類(lèi)、3-脫氫視黃醇(3-dehydroretinol;vitamin A2)及其酯類(lèi),視黃醛、視黃酸、新維生素A(neovitamin A)等。維生素A在肝臟脂肪組織里以酯類(lèi)形式儲(chǔ)存,維生素 A 棕櫚酸酯(retinol palmitate)維生素A乙酸酯(retinol acetate),占5%,而95%以水解形式,在體內(nèi)循環(huán)。維生素A在維護(hù)動(dòng)物和人體眼睛、呼吸和生殖系統(tǒng)的上皮組織,以及骨發(fā)育的正常功能方面起著主要作用。維生素A缺陷將導(dǎo)致眼球干燥癥xerophthalmia)、皮膚異常、易發(fā)感染;維生素A中毒會(huì)出現(xiàn)困倦(drowsiness)、顱壓(cranial pressure)增加、血鈣過(guò)高(hypercalcemia)、脫發(fā)、高胡蘿卜素血癥(hypercarotenemia)等。通過(guò)抗氧化處理和有機(jī)溶劑萃取,進(jìn)而在高效液相色譜儀和紫外光譜下(325nm波長(zhǎng))檢測(cè)分析,分離出維生素A,即視黃醇波峰,以定量分析維生素A的含量。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

GENMED緩沖液(Reagent A)       10毫升

GENMED萃取液A(Reagent B)        20毫升

GENMED萃取液B(Reagent C)       40毫升

GENMED去干擾液(Reagent D)       20毫升

GENMED溶解液(Reagent E)        5毫升

GENMED流相液(Reagent F)      500毫升

GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G)      500微升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)      1份

 

保存方式

 

保存GENMED緩沖液(Reagent A)、GENMED萃取液A(Reagent B)和GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G)在-20冰箱里,其余的保存在4冰箱里,GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G)避免光照;試劑具有揮發(fā)性,注意密閉瓶蓋;GENMED萃取液B(Reagent C)、GENMED去干擾液(Reagent D)和GENMED流相液(Reagent F)具有腐蝕性,注意操作安全;有效保證3月

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管:用于樣品處理和標(biāo)準(zhǔn)液配制的容器

2毫升離心管:用于樣品操作的容器

15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器

(微型)臺(tái)式離心機(jī):用于樣品處理

干式培養(yǎng)箱或離心濃縮儀:用于樣品干化

高效液相色譜儀(HPLC):用于定量測(cè)定

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

  • 樣品準(zhǔn)備 

 

  • 血漿樣品準(zhǔn)備

 

  • 準(zhǔn)備好EDTA抗凝管
  • 抽取1毫升血液,置于抗凝管里
  • 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為700g或3000RPM,例如eppendorf 5415
  • 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血漿成分(注意:避免觸碰白色液體層
  • (選擇步驟)即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)-70℃冰箱里保存
  • 移取500微升血漿到15毫升錐形離心管
  • 加入500微升GENMED緩沖液(Reagent A),混勻
  • 加入1毫升GENMED萃取液A(Reagent B)
  • 渦旋震蕩20秒
  • 加入2毫升GENMED萃取液B(Reagent C)
  • 渦旋震蕩1分鐘
  • 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為1000g 
  • 移取2毫升上層液相到2毫升離心管
  • 放進(jìn)40干式培養(yǎng)箱晾干或離心濃縮儀揮干
  • 加入100微升GENMED溶解液(Reagent E),混勻,避免光照
  • 即刻進(jìn)行后續(xù)高效液相色譜分析

 

  • 血清樣品準(zhǔn)備

 

  • 準(zhǔn)備好不含抗凝劑的儲(chǔ)存管 
  • 抽取1毫升血液,置于儲(chǔ)存管里
  • 室溫下,靜置30分鐘,直至血液凝結(jié)
  • 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘,速度為2000g或5000RPM,例如eppendorf 5415
  • 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血清成分(注意:避免觸碰白色液體層
  • (選擇步驟)即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)-70℃冰箱里保存
  • 移取200微升血清到新的2毫升離心管
  • 加入200微升GENMED緩沖液(Reagent A),混勻
  • 加入400微升GENMED萃取液A(Reagent B)
  • 渦旋震蕩20秒
  • 加入800微升GENMED去干擾液(Reagent D)
  • 渦旋震蕩1分鐘
  • 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為8500g
  • 移取800微升下層液相到2毫升離心管
  • 放進(jìn)40干式培養(yǎng)箱晾干或離心濃縮儀揮干
  • 加入100微升GENMED溶解液(Reagent E),混勻,避免光照
  • 即刻進(jìn)行后續(xù)高效液相色譜分析

 

  • 測(cè)定準(zhǔn)備

 

  • 開(kāi)啟儀器預(yù)熱15分鐘
  • 根據(jù)下表設(shè)置高效液相色譜儀(HPLC)參數(shù)

 

參數(shù)

推薦

補(bǔ)充說(shuō)明

色譜柱

長(zhǎng)度:15cm

直徑:3.9mm

Waters儀器或

Agilent儀器

固定相

ODS

 

流動(dòng)相

GENMED流相液(Reagent F)

流速

2毫升/分鐘

 

注射容量

100微升

10微升至100微升

檢測(cè)

紫外

 

波長(zhǎng)

325nm

 

柱溫

30

 

峰值時(shí)間(retention)

7分鐘

視黃醇(retinol)

運(yùn)行時(shí)間

20分鐘

參考

 

  • 使用GENMED流相液(Reagent F)運(yùn)行1次(30毫升),以達(dá)到色譜柱均衡和溫度穩(wěn)定

 

  • 標(biāo)準(zhǔn)樣品配制

 

  • 準(zhǔn)備好5個(gè)1.5毫升離心管,標(biāo)記為15號(hào)管
  • 分別加入100微升GENMED溶解液(Reagent E15號(hào)管
  • 移取100微升GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G1號(hào)管,混勻
  • 小心移取100微升1號(hào)管稀釋的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G2號(hào)管,混勻
  • 小心移取100微升2號(hào)管稀釋的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G3號(hào)管,混勻
  • 小心移取100微升3號(hào)管稀釋的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G4號(hào)管,混勻
  • 15號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用,避免光照;標(biāo)準(zhǔn)管濃度見(jiàn)下表

管號(hào)

GENMED溶解液(Reagent E

GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G

標(biāo)準(zhǔn)視黃醇濃度

1

100微升

100微升

20微克/毫升

2

100微升

100微升1號(hào)管

10微克/毫升

3

100微升

100微升2號(hào)管

5微克/毫升

4

100微升

100微升3號(hào)管

2.5微克/毫升

5

100微升

0

0

 

四、色譜分析

 

  • 將上述配制的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G)和待測(cè)樣品放進(jìn)30培養(yǎng)箱預(yù)熱
  • 每次(每個(gè)樣品)注射100微升
  • 每次(每個(gè)樣品)運(yùn)行10至20分鐘
  • 獲得色譜波峰圖:波峰面積(peak area)或峰值,保存記錄
  • 全部運(yùn)行完成,使用適量的GENMED流相液(Reagent F)清洗色譜柱

 

五、計(jì)算含量

 

  • 方法一:通過(guò)儀器中的軟件進(jìn)行測(cè)算
  • 方法二:構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線:縱座標(biāo)(Y軸)為波峰面積(peak area);橫座標(biāo)(X軸)為標(biāo)準(zhǔn)視黃醇濃度(微克/毫升),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)視黃醇濃度(微克/毫升)
  • 方法三:公式計(jì)算(選擇單一濃度的標(biāo)準(zhǔn)液)

 

樣本視黃醇濃度(微克/毫升)=【樣本波峰面積(peak area)X標(biāo)準(zhǔn)視黃醇濃度÷對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)視黃醇濃度的波峰面積

 

 注意事項(xiàng)

 

  • 本產(chǎn)品為20次操作 
  • 本產(chǎn)品可以用于視黃醇(retinol)、視黃醛(retinaldehyde)、視黃酸(retinoic acid、3-脫氫視黃醇(3-dehydroretinol;vitamin A2)、維生素 A 棕櫚酸酯(retinol palmitate)維生素A乙酸酯(retinol acetate)等的檢測(cè)
  • 本產(chǎn)品檢測(cè)范圍是0.350毫克/
  • 操作時(shí),須戴手套
  • 試劑具有揮發(fā)性,注意密閉瓶蓋或使用封口膜
  • 樣品避免光照
  • 樣品建議新鮮采集,避免溶血
  • GENMED萃取液B(Reagent C)、GENMED去干擾液(Reagent D)GENMED流相液(Reagent F)具有腐蝕性,注意操作安全
  • 色譜柱的異物殘留、氣泡產(chǎn)生、溫度未達(dá)均衡等將導(dǎo)致異常波峰、時(shí)間偏移等
  • 用戶可以使用已知濃度的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G)作為內(nèi)參標(biāo)準(zhǔn)加入到樣品中,檢測(cè)回收率(recovery)
  • 維生素A的HPLC參考圖譜如下

 

 

 

 

  • 維生素A及其衍生物的出峰時(shí)間(retention)以用戶操作時(shí),使用的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G實(shí)際出峰為準(zhǔn)
  • 本公司提供系列維生素檢測(cè)試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感

 

使用承諾

 

秉著信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后,應(yīng)按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷(xiāo)售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定,保證說(shuō)明書(shū)所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問(wèn)題,請(qǐng)立即以書(shū)面形式(實(shí)驗(yàn)報(bào)告)與本公司聯(lián)系,并將該產(chǎn)品退回,經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致,本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致,本公司不承擔(dān)由此造成的損失。

 

友情提醒

 

IF IT DOESN’T WORK, RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

訂購(gòu)信息

 

單組份訂購(gòu)信息

 

編號(hào) 名稱(chēng) 規(guī)格

GMS19066.2.2 GENMED血液維生素A高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒 20

GMS19066.2.2A GENMED緩沖液(Reagent A     100毫升

GMS19066.2.2B GENMED萃取AReagent B 100毫升

GMS19066.2.2C GENMED萃取BReagent C      100毫升

GMS19066.2.2D GENMED去干擾液(Reagent D 100毫升

GMS19066.2.2E GENMED溶解液(Reagent E 50毫升

GMS19066.2.2F  GENMED流相液(Reagent F 500毫升

GMS19066.2.2G  GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G      1毫升

 

試劑盒訂購(gòu)信息

 

產(chǎn)品編號(hào)

名稱(chēng)

規(guī)格

GMS19066.2.1

通用型維生素A高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒

20次

GMS19066.2.2

血液維生素A高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒

20次

GMS19066.2.3

組織維生素A高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒

20次

GMS19066.2.4

食物維生素A高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒

20次

GMS19066.2.5

牛奶維生素A高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒

20次

GMS19066.2.6

魚(yú)肝油維生素A高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒

20次

 

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

CCK8檢測(cè)

基因組DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

 

免疫組化

熒光定量PCR

動(dòng)物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測(cè)

細(xì)胞增殖

激光共聚焦

DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞劃痕

鈣離子濃度檢測(cè)

掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

microRNA 測(cè)序

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

Taqman探針

ATP/ADP檢測(cè)

 

石蠟/冰凍切片

定點(diǎn)突變

線粒體膜電位(MMP)檢測(cè)

細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

 

免疫共沉淀

真核表達(dá)載體構(gòu)建

染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

非標(biāo)定量(Label-free)實(shí)驗(yàn)

滬公網(wǎng)安備 31011802001678號(hào)

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