細胞分離液屬于生化試劑,利用細胞分離液對機體細胞標(biāo)本進行前處理,以獲取所需要的細胞標(biāo)本。
細胞分離液是一種經(jīng)過聚乙烯吡咯烷酮處理過的硅膠顆粒,經(jīng)過高速離心后可形成連續(xù)密度梯度,由于Percoll擴散常數(shù)低,所形成的梯度十分穩(wěn)定。
細胞分離液的配置與使用:
1、不同濃度(密度)分離液的制備: 先用9份分離液與1份8.5% NaCl或1.5MPBS混合達到生理性滲透壓,然后用生理溶液(0.85% NaCl或0.15M PBS)稀釋到所需濃度。
2、不連續(xù)密度梯度層的制備: 先將試管壁用牛血清濕潤,除去多余血清,這種預(yù)處理可使逐層疊加的液平穩(wěn)沿管壁流下,使形成滿意的界面。在制備過程中一般用長針頭注射器從高密度向低密度逐層放置,有時相鄰兩層比重相差不大時,可將液放入注射器中,小針頭斜面緊貼管壁,任其自然慢慢流下。
3、裝樣:樣品體積和細胞濃度根據(jù)不同細胞而異,一般加樣體積不宜過大,細胞濃度也不可過高,否則會影響細胞的分離和回收。
4、離心:一般采用離心力為400g,時間20~25min。由于多層之間密度差別不大,因此離心機加速、降速時要慢,要平穩(wěn)。
5、取樣:當(dāng)所要分離的細胞絕大部分在兩層的界面時,可逐層去除液后收集界面部位的細胞;有時大部分細胞位于層中,則需要逐層收集。收獲含有液的細胞經(jīng)2次洗滌后可供培養(yǎng)或檢測用。