HCT-15/5FU 人結(jié)直腸癌氟尿嘧啶耐藥株
Fluorouracil resistant strains of human colorectal cancer ,HCT15/5FU
貨號：YJ-h073（STR（HCT15）鑒定）
價格： 2500.0
規(guī)格： 1*106
細胞介紹
HCT-15/FU為由HCT-15細胞構(gòu)建的耐5-FU藥物細胞株。
細胞特性
1）來源：人結(jié)腸癌細胞耐藥篩選 | 2）形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長 |
3）含量：>1×10^6 細胞數(shù) | 4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝 |
5）用途：僅供科研使用。 |
細胞運輸、保存及注意事項
復(fù)蘇細胞 | 凍存細胞 | |
包裝 | 充液的T25細胞培養(yǎng)瓶 | 1mL凍存管 |
運輸條件 | 常溫 | 干冰 |
保存方式 | 37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱 | -80℃冰箱中保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮 或立即復(fù)蘇 |
※注意事項 | 1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液及細胞有污染；或凍存管有破損，融化、漏液等，請立即拍照并聯(lián)系我們。照片包括細胞培養(yǎng)瓶/凍存管外觀，顯微鏡下細胞照片（100倍，200倍各2張）； 2. 若收到的復(fù)蘇細胞有少量細胞脫落、飄起，可能由于運輸途中導(dǎo)致。請先于37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中靜置2~3h后，再進行處理； 3. 復(fù)蘇細胞的充液培養(yǎng)基為不含藥物的維持培養(yǎng)基，血清濃度較低，收到細胞后請及時更換為完全培養(yǎng)基； 4. 建議收到細胞后，首先進行擴增（至少3代），并凍存部分細胞以備用。 5. 初次培養(yǎng)，當(dāng)細胞匯合度達約80%時，可加入10~16ug/mL 5-FU的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細胞完全融合后傳代。細胞傳代1~2次后仍能保持增殖，即可提高藥物濃度至20ug/mL繼續(xù)培養(yǎng)；若此過程中細胞停止增殖，且狀態(tài)較差，則需降低藥物濃度（首次降低一半藥物濃度）或使用不含藥物的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細胞匯合度達80%左右，且生長狀態(tài)較好時，再更換為所需的5-FU藥物濃度。 6. 細胞凍存過程中，不可添加藥物，且凍存液中不含藥物。 | |
細胞培養(yǎng)試劑的配制
1）5-FU藥物的配制及保存
建議將5-FU藥物配制成20mg/mL的母液，即使用1mL 1M的NaOH溶液溶解20mg 5-FU藥物，使其完全溶解。（若所購買的5-FU藥物規(guī)格為10mg，則加入0.5mL 1M的NaOH溶液，待其完全溶解即為20mg/mL母液）
注意：可根據(jù)用量配置藥物，并將藥物分裝保存，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致藥物失效。溶解后的5-FU，4℃保存1周，-20℃保存1個月，-80℃保存6個月。
2）凍存液的配制
90%優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。（凍存液中不含藥物）
3）完全培養(yǎng)基的配制（推薦使用YJ-h073-001b）
成分 | 體積/濃度 |
優(yōu)質(zhì)胎牛血清 | 10% |
雙抗 | 1% |
20ug/mL 5-FU | 0.1%母液（20mg/mL） |
RPMI-1640培養(yǎng)基 | 補充至所需體積 |
細胞培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%~80%。
細胞處理
1）凍存細胞的復(fù)蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4~6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm/min離心3~5min，棄去上清液。加入1mL完全培養(yǎng)基重懸細胞后，均勻鋪于含6~8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中，置于37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
注意：①細胞復(fù)蘇過程中，不可使用含有藥物的培養(yǎng)基。須在細胞生長至匯合度達80%左右時，方可添加10~16ug/mL 5-FU藥物；若細胞生長狀態(tài)較為緩慢，可適當(dāng)降低5-FU的濃度（首次降低一半藥物濃度），或使用不含5-FU的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細胞生長狀態(tài)較好時，再更換為所需的5-FU濃度。
②建議復(fù)蘇細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩，避免凍存管處于溫差較大情況下發(fā)生爆炸，造成人員傷害。
2）細胞傳代（建議以同等底面積的培養(yǎng)瓶/皿按照1：2比例傳代）
①待細胞密度達到80%~90%時，即可進行傳代培養(yǎng)。
②棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1次，吸凈殘余的PBS。
③加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化2~5min，顯微鏡下觀察細胞細胞大部分變圓并脫落，即可輕拍培養(yǎng)瓶至細胞全部脫落。迅速拿回操作臺，加入2倍體積的、含10%FBS的培養(yǎng)基中止消化。
④將細胞懸液移入離心管中，1000rpm/min離心5min，棄去上清液。
⑤向細胞沉淀中加入1~2mL完全培養(yǎng)基重懸細胞，輕吹混勻。將細胞懸液按1：1的比例均勻鋪于2個新的培養(yǎng)瓶/皿中，添加6~8mL完全培養(yǎng)基。
注意：細胞傳代1~2次后仍能保持增殖，即可提高藥物濃度至20ug/mL繼續(xù)培養(yǎng)；若此過程中細胞停止增殖，且狀態(tài)較差，則需降低藥物濃度（首次降低一半藥物濃度）或使用不含藥物的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細胞匯合度約80%，且生長狀態(tài)較好時，再更換為所需的5-FU藥物濃度。
3）細胞凍存
①細胞凍存時，步驟同2）細胞傳代的①~④，細胞計數(shù)后，加入配制好的細胞凍存液，重懸細胞，按照1×10^6 ~ 1×107個細胞/mL分配到一個凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
注意：細胞凍存過程中，不可添加藥物。
②將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
注意事項
1.收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。
3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實驗技術(shù)及論文潤色服務(wù)，協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色十余年，是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!
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