| 更新時間： | 2019-06-03 |
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| 所屬分類： | （牛奶﹑羊奶﹑奶粉）檢測 |
| 報 價： |  |
公司的獸藥殘留快速檢測試劑盒（例：克倫特羅檢測試劑盒、氯霉素檢測試劑盒、硝基呋喃類檢測試劑盒）、動物疾病診斷試劑（例：豬弓形蟲抗體檢測試劑盒、豬藍(lán)耳病檢測試劑盒、豬瘟病毒檢測試劑盒）、分子生物學(xué)工具酶、綠色水產(chǎn)藥品等一系列的產(chǎn)品已在國家機(jī)關(guān)、企業(yè)、科研單位廣為應(yīng)用。
氟苯尼考快速檢測試劑盒說明書
一、原理
本試劑盒采用間接競爭 ELISA 方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物氟苯尼考將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗氟苯尼考抗體，加入酶標(biāo)記物后，用 TMB 底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物氟苯尼考的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物氟苯尼考的含量。
二、試劑盒特性
- 試劑盒靈敏度： 0.1ppb
u 孵育溫度： 25℃
u 孵育時間： 30min～15min
- 樣本檢測下限
蜂蜜、組織········································· 0.1ppb
牛奶················································ 0.2ppb
- 交叉反應(yīng)率
氟苯尼考· ································· ··· 100%
甲砜霉素 ········································ < 0.1%
氟苯尼考胺 ······································ 11%
氯霉素 ············································ < 0.1%
- 樣本回收率
組 | 織 ······································ | 90%±30% | ||
蜂 | 蜜 ······································ | 90%±30% | ||
牛 | 奶 ······································ | 90%±30% | ||
三、試劑盒組成 |
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1 |
| 微量測試孔 | 每條 8 孔，一板 12 條 | |
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| 標(biāo)準(zhǔn)液×6 瓶 | 0ppb | 0.1ppb |
2 |
| 0.2ppb | 0.4ppb | |
| （1ml/瓶） | |||
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| 0.8ppb | 1.6ppb | |
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3 |
| 酶標(biāo)記物 | 7ml | 紅色帽 |
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4 | 抗體工作液 | 7ml | 藍(lán)色帽 |
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5 | 底物 A 液 | 7ml | 白色帽 |
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6 | 底物 B 液 | 7ml | 黑色帽 |
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7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
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8 | 20X 濃縮洗滌液 | 40ml | 白色帽 |
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9 | 2X 濃縮復(fù)溶液 | 50ml | 透明帽 |
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四、所用儀器、試劑
具備的儀器：酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量 0.01g）、氮吹儀、恒溫箱
微量移液器：單道 20～200µl、單道 100～1000µl、
多道 30～300 µl
試 劑：乙酸乙酯、正己烷、乙腈
五、樣本前處理步驟
- 樣本處理前須知
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。
（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。
u 樣本前處理需配制：
配液 1 樣本復(fù)溶液：
將 2X 濃縮復(fù)溶液用去離子水按 1：1 稀釋。 (1 份濃縮復(fù)溶掖+1 份去離子水)。
配液 2 樣本提取液：
將乙腈與乙酸乙酯按 1:2 比例混合均勻（1 份乙腈+2 份乙酸乙酯）。
- 樣本處理：
（a）組織 (雞肉/肝、豬肉/肝、蝦、魚等)樣本處理方法
1、稱取均質(zhì)后的樣本 3±0.05g 于 50ml 離心管中，先加入 3ml 去離子水混勻后再加入 6ml 乙酸乙酯，振蕩 2min，室溫 4000r/min 以上離心 10min；
2、取出 2ml 上層液體在 50-60℃氮氣流中吹干；
3、加入 2 ml 正己烷溶解干燥的殘留物，再加 1ml
樣本復(fù)溶液混合 30s，室溫 4000r/min 以上離心5min；去除上層有機(jī)相；
4、取 50 µl 下層相用于分析
樣本稀釋倍數(shù): 1 倍
（b）蜂蜜處理方法
1、取 2±0.05 g 蜂蜜，放入離心管中，用 4ml 去離子水溶解；加入 4ml 乙酸乙酯振蕩 2min，室溫
4000r/min 以上離心 10min；2、移取 2ml 上層清澈液到另一離心管中，50-60℃
氮氣流下干燥；用 1ml 樣本復(fù)溶液溶解干燥的殘留物，混合 30s；
3、取 50 µl 用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)： 1 倍
（c）牛奶樣本處理方法
1、 吸取均質(zhì)后的牛奶樣本 1ml 于 5ml 離心管中，加 入 2ml 樣本提取液（配液 2）振蕩 1min，
室溫 4000r/min 以上離心 10min；2、 取出 1ml 上層液體在 50-60℃氮氣流中吹干；
3、加入 1 ml 正己烷溶解干燥的殘留物，再加 1ml
樣本復(fù)溶液混合 30s，室溫 4000r/min 以上離心5min；去除上層有機(jī)相；
4、 取 50 µl 下層相用于分析。
樣本稀釋倍數(shù): 2 倍
六、酶標(biāo)免疫分析程序:
- 測定前應(yīng)須知：
1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫
（20～25℃）。
2、 使用之后立即將所有試劑放回 2～8℃。
3、 在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的*性，正確的洗板操作是 ELISA 測定程序中的要點。
4、 所有恒溫孵育過程，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。
- 操作步驟：
1、從 2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，室溫（20～
25℃）平衡 30min 以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放
入自封袋，保存于 2-8℃。
3、配液：將 40ml 濃縮洗滌液（20 倍濃縮）用去離子水按照 1：19 稀釋（1 份濃縮洗滌液+19 份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。
4、編號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做 2 孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品 50µl/孔到各自的微孔中，加入酶標(biāo)記物 50µl/孔，然后再加入抗體工作液 50µl/ 孔，用蓋板膜封板，25℃環(huán)境中反應(yīng) 30min。
6、將孔內(nèi)液體甩干，用已稀釋的洗滌液 250µl/孔洗板 4～5 次，每次間隔 15～30 秒，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
7、顯色：加入底物 A 液 50µl/孔，再加入底物 B
液 50µl/孔，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色 15min。
8、測定：加入終止液 50µl/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于 450nm 處（建議用雙波長 450/630n m 檢測，5min 內(nèi)讀數(shù)），測定每孔 OD 值。
七、結(jié)果判定
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第 1 種方法，定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與其所含氟苯尼考量成負(fù)相關(guān)。
1、粗略判定：
用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本 1 的吸光度值為 0.3，樣本 2 的吸光度值為 1.0，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb
- 2.243； 0.1ppb 為 1.816；0.2ppb 為 1.415；0.4ppb
- 0.74；0.8ppb 為 0.313；1.6ppb 為 0.155。則樣本
1 的濃度范圍是 0.8ppb～1.6ppb；樣本 2 的濃度范圍是 0.2ppb～0.4ppb，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氟苯尼考實際濃度。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以*個標(biāo)準(zhǔn)（0 標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以 100%，即
B
百分吸光率（%）＝ ×100%
B0
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml 標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以氟苯尼考標(biāo)
準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氟苯尼考實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（索取）
八、 注意事項
1、室溫低于 25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫（20～
25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的 OD 值偏低。
2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
3、混合要均勻，否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
4、反應(yīng)終止液為 2M 硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒；稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD 值變化；不要交換使用不同批號的盒中試劑。
6、不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品 1 的吸光度值小于 0.5 時，表示試劑可能變質(zhì)。
8、該試劑盒理想反應(yīng)溫度為 25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
九、儲藏條件和保質(zhì)期
1、儲藏條件：試劑盒于 2-8℃保存，不要冷凍。
2、保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為 1 年，生產(chǎn)日期見包裝盒。
提示：酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣，酶標(biāo)板仍然正常有效，不影響實驗結(jié)果，請放心使用。
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